顯微鏡的使用方法與步驟 一、取鏡和安放  1．右手握住鏡臂，左手托住鏡座。  2．把顯微鏡放在實驗臺上，略偏左（顯微鏡放在距實驗臺邊緣7厘米左右 處）。安裝好目鏡和物鏡。  二、對光  3．轉動轉換器，使低倍物鏡對準通光孔(物鏡的前端與載物臺要保持2厘米的距離)。  4．把一個較大的光圈對準通光孔。左眼注視目鏡內(右眼睜開，便于以后同時畫圖)。轉動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內。通過目鏡，可以看到白亮的視野。  三、觀察  5．把所要觀察的玻片標本（也可以用印有“6”字的薄紙片制成）放在載物臺上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。  6．轉動粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標本）。  7．左眼向目鏡內看，同時反方向轉動粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。再略微轉動細準焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 8．高倍物鏡的使用：使用高倍物鏡之前，必須先用低倍物鏡找到觀察的物象，并調到視野的正中央，然后轉動轉換器再換高倍鏡。換用高倍鏡后，視野內亮度變暗，因此一般選用較大的光圈并使用反光鏡的凹面，然后調節細準焦螺旋。觀看的物體數目變少，但是體積變大。  四、整理 8．實驗完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉動轉換器，把兩個物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到**處，反光鏡豎直放置。**把顯微鏡放進鏡箱里，送回原處。 《注意事項》： 1、嚴忌單手提取顯微鏡。  2、若須移動顯微鏡，務必將顯微鏡提起再放至適當位置，嚴忌推動顯微鏡（推動時造成的震動可能會導致顯微鏡內部零件的松動，切記!!），使用顯微鏡請務必小心輕放。  3、使用顯微鏡時坐椅的高度應適當，觀察時更應習慣兩眼同時觀察，且光圈及光源亮度皆應適當，否則長時間觀察時極易感覺疲勞。  4、轉動旋轉盤時務必將載物臺降至**點，以免因操作不當而刮傷接目鏡之鏡頭。  5、標本染色或其它任何操作皆應將玻片取下，操作完成后再放回載物臺觀察，切勿在載物臺上操作，以免染劑或其它液體流入顯微鏡內部或傷及鏡頭。  6、觀察完一種材料，欲更換另一種材料時，務必將載物臺下降至**點，換好玻片后再依標準程序重新對焦，切勿直接抽換標本，以免刮傷鏡頭或玻片標本。  7、用畢顯微鏡應將載物臺下降至**點，并將低倍鏡對準載物臺中央圓孔處，將電源線卷好，蓋上防塵罩，并收入存放柜中。

2016年12月31日/生物谷BIOON/---光學顯微鏡的**目標是改善這種方法的分辨率以至于一個人能夠單個地區分彼此間挨得非常近的分子。如今，來自德國馬克斯-普朗克生物物理化學研究所的諾貝爾獎得主Stefan Hell和同事們實現了長期以來被認為是不可能實現的目標：他們開發出一種新的被稱作MINFLUX的熒光顯微鏡，從而**允許利用光學手段區分彼此間相隔幾納米的分子。這種顯微鏡在分辨率上要比常規的光學顯微鏡高出100倍，而且甚至超過迄今為止**的超分辨率光學顯微鏡--- Hell開發的STED和諾貝爾獎得主Eric Betzig描述的PALM/STORM ---高達20倍。對MINFLUX而言，Hell以一種全新的概念結合了STED和PALM/STORM的優勢。這一突破為科學家們在分子水平上研究生命如何發揮功能提供新的機會。相關研究結果于2016年12月22日在線發表在Science期刊上，論文標題為“Nanometer resolution imaging and tracking of fluorescent molecules with minimal photon fluxes”。Hell解釋道，“我們利用MINFLUX實現1納米的分辨率，這是單個分子的直徑---在熒光顯微鏡中可能實現的＊終分辨率限制。我深信MINFLUX顯微鏡有潛力成為細胞生物學＊為基礎的工具之一。基于此，在分子細節上繪制細胞圖譜和實時觀察它們內部快速發生的過程將是可能的。這可能能夠在我們了解活細胞中發生的分子過程方面引發變革。”Hell長期以來深信利用經常使用的聚焦光線和常規透鏡，熒光顯微鏡分辨率能夠增加到單分子水平。事實上，物理學家Ernst Abbe在1873年提出光學顯微鏡的分辨率限制在光的波長的一半，大約是200納米。100多年后，這種阿貝限制（Abbe limit）仍然是有效的。然而，Hell是第一個證實這種限制能夠被STED顯微鏡克服：他1994年想出這種方法，在5年后，實驗性地構建出這種STED顯微鏡。STED以及5年后開發的PALM/STORM實際上達到大約20～30納米的分辨率---大約比這種阿貝限制好10倍。由于開發這些超高分辨率顯微鏡技術，Hell和Betzig一起在2014年獲得諾貝爾化學獎。將STED和PALM/STORM的優勢結合在一起STED和PALM/STORM通過一個接一個地開啟和關閉相鄰的熒光分子，這樣它們有序地發出熒光，從而將它們區分開來。然而，這兩種方法在一個關鍵點上存在差異：STED顯微鏡利用一種圓環形的激光束在樣品中的固定位置---除圓環中心之外的聚焦區域中的任何一個位置---上關閉分子熒光。它的優勢在于這種圓環形激光束精確地確定對應的熒光分子位于空間中的哪個點上。它的劣勢在于事實上，這種激光束并不足夠強，因而不能夠將發出的熒光局限在這種圓環中心的單個分子上。另一方面，就PALM/STORM而言，它能夠在分子水平上和在隨機的位置上進行開啟和關閉。它的優勢在于人們已能夠在單分子水平上進行檢測，但是它的劣勢在于人們并不能夠知道分子在空間中的精確位置。這些位置不得不通過在照相機上盡可能多收集熒光光子方能找出；獲得不到10納米的分辨率需要50,000多個檢測到的光子。因此，人們不能夠實現分子水平（一納米）的分辨率。在一種新的概念中，Hell想要將這兩種方法的優勢獨特地結合在一起。“這個任務是微不足道的。但是，我的同事Francisco Balzarotti、Yvan Eilers和Klaus Gwosch在同我一起利用實驗實現這種想法上做了出色的工作。”與PALM/STORM一樣，MINFLUX隨機地開啟和關閉單個分子。然而，與此同時，它們的精確位置可通過類似于STED中的圓環形激光束加以確定。不同于STED的是，這種圓環形激光束在MINFLUX中激發熒光產生。如果這個分子位于圓環表面上的話，它將發出熒光；如果它正好位于昏暗的圓環中心的話，它不會發光熒光，但是人們能夠發現它的精確位置。Balzarotti開發出一種聰明的算法以至于這種位置能夠非常快速地和高精度地被確定出來。這位年輕的科學家解釋道，“利用這種算法，探究圓環形激發光束的潛力是可能的。”獲得分子分辨率圖片的Gwosch補充道，“這真是令人難以置信，我們**能夠利用MINFLUX在幾納米尺度上區分細節。”分辨率提高100倍除了實現分子分辨率外，將STED和PALM/STORM結合在一起也提供另一種主要優勢：Hell聲稱，“相比而言，MINFLUX更加快速。鑒于它利用一種圓環形激光束工作，相比于PALM/STORM而言，在獲得每個分子＊終的分辨率上，它需要更低的光信號或者說更少的熒光光子。”人們已經能夠利用STED實時地記錄活細胞內部的影像。但是，正如Eilers所強調的那樣，如今，在一種時間分辨率提高100倍的情形下追蹤細胞中的分子運動是可能的。他**成功地利用MINFLUX以一種****的時空分辨率拍攝出活的大腸桿菌中分子運動的影像。Eilers說，“就速度而言，我們還沒有充分利用MINFLUX。”研究人員深信在未來，能夠研究活細胞中極其快速發生的變化，比如細胞納米機器的運動，或者蛋白折疊。